Ang Osteoarthritis (OA) ay isa sa mga pangmatagalang talamak na degenerative bone joint disease na nakakaapekto sa mga may edad na populasyon na higit sa 65.
1]. Sa pangkalahatan, ang mga pasyente ng OA ay na-diagnose na may napinsalang cartilage, inflamed synovium, at eroded chondrocytes, na nag-trigger ng sakit at pisikal na pagkabalisa.
2]. Ang pananakit ng arthritis ay pangunahing sanhi ng pagkabulok ng kartilago sa mga kasukasuan sa pamamagitan ng pamamaga, at kapag ang kartilago ay malubhang napinsala, ang mga buto ay maaaring magbanggaan sa isa't isa na nagdudulot ng hindi matiis na sakit at pisikal na paghihirap.
3]. Ang pagkakasangkot ng mga nagpapaalab na tagapamagitan na may mga sintomas tulad ng pananakit, pamamaga, at paninigas ng kasukasuan ay mahusay na dokumentado. Sa mga pasyente ng OA, ang mga nagpapaalab na cytokine, na nagiging sanhi ng pagguho ng cartilage at subchondral bone ay matatagpuan sa synovial fluid [
4]. Dalawang pangunahing reklamo na karaniwang mayroon ang mga pasyenteng OA ay pananakit at pamamaga ng synovial. Samakatuwid ang mga pangunahing layunin ng kasalukuyang mga therapy sa OA ay upang mapababa ang sakit at pamamaga. [
5]. Kahit na ang mga magagamit na paggamot sa OA, kabilang ang mga non-steroidal at steroidal na gamot, ay napatunayang epektibo sa pagpapagaan ng sakit at pamamaga, ang pangmatagalang paggamit ng mga gamot na ito ay may malubhang kahihinatnan sa kalusugan tulad ng cardiovascular, gastro-intestinal, at renal dysfunctions [
6]. Kaya, ang isang mas mabisang gamot na may mas kaunting epekto ay kailangang bumuo para sa paggamot ng osteoarthritis.
Ang mga natural na produktong pangkalusugan ay lalong nagiging popular para sa pagiging ligtas at madaling makuha [
7]. Ang mga tradisyunal na gamot sa Korea ay napatunayang epektibo laban sa ilang mga nagpapaalab na sakit, kabilang ang arthritis [
8]. Aucklandia lappa DC. ay kilala sa mga nakapagpapagaling na katangian nito, tulad ng pagpapahusay ng sirkulasyon ng qi para sa pag-alis ng sakit at pagpapatahimik sa tiyan, at ginamit nang tradisyonal bilang natural na analgesic [
9]. Iminumungkahi ng mga naunang ulat na ang A. lappa ay nagtataglay ng anti-inflammatory [
10,
11], analgesic [
12], anticancer [
13], at gastroprotective [
14] mga epekto. Ang iba't ibang mga biological na aktibidad ng A. lappa ay sanhi ng mga pangunahing aktibong compound nito: costunolide, dehydrocostus lactone, dihydrocostunolide, costuslactone, α-costol, saussurea lactone at costuslactone [
15]. Sinasabi ng mga naunang pag-aaral na ang costunolide ay nagpakita ng mga anti-inflammatory properties sa lipopolysaccharide (LPS), na nag-udyok sa mga macrophage sa pamamagitan ng regulasyon ng NF-kB at heat shock protein pathway [
16,
17]. Gayunpaman, walang pag-aaral ang nag-imbestiga sa mga potensyal na aktibidad ng A. lappa para sa paggamot sa OA. Ang kasalukuyang pananaliksik ay nag-imbestiga sa mga therapeutic effect ng A. lappa laban sa OA gamit ang (monosodium-iodoacetate) MIA at acetic acid-induced rodent models.
Ang Monosodium-iodoacetate (MIA) ay sikat na ginagamit upang makagawa ng karamihan sa mga pag-uugali ng sakit at ang mga pathophysiological na tampok ng OA sa mga hayop [
18,
19,
20]. Kapag iniksyon sa mga kasukasuan ng tuhod, ginulo ng MIA ang metabolismo ng chondrocyte at nagdudulot ng pamamaga at mga sintomas ng pamamaga, tulad ng cartilage at subchondral bone erosion, ang mga pangunahing sintomas ng OA [
18]. Ang writhing response na dulot ng acetic acid ay malawak na itinuturing bilang simulation ng peripheral pain sa mga hayop kung saan ang inflammatory pain ay masusukat sa dami [
19]. Ang mouse macrophage cell line, RAW264.7, ay sikat na ginagamit upang pag-aralan ang mga cellular na tugon sa pamamaga. Sa pag-activate sa LPS, ang mga RAW264 macrophage ay nag-a-activate ng mga inflammatory pathway at naglalabas ng ilang inflammatory intermediary, tulad ng TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS, at IL-6 [
20]. Sinuri ng pag-aaral na ito ang anti-nociceptive at anti-inflammatory effect ng A. lappa laban sa OA sa MIA animal model, acetic acid-induced animal model, at LPS-activated RAW264.7 cells.
2. Mga Materyales at Pamamaraan
2.1. Materyal ng Halaman
Ang tuyong ugat ng A. lappa DC. ginamit sa eksperimento ay nakuha mula sa Epulip Pharmaceutical Co., Ltd., (Seoul, Korea). Kinilala ito ni Prof. Donghun Lee, Dept. of Herbal pharmacology, Col. of Korean Medicine, Gachon University, at ang voucher specimen number ay idineposito bilang 18060301.
2.2. Pagsusuri ng HPLC ng A. lappa Extract
Ang A. lappa ay nakuha gamit ang isang reflux apparatus (distilled water, 3 h sa 100 °C). Ang nakuha na solusyon ay sinala at pinalapot gamit ang isang mababang presyon ng pangsingaw. Ang A. lappa extract ay nagkaroon ng yield na 44.69% pagkatapos ng freeze-drying sa ilalim ng −80 °C. Ang Chromatographic analysis ng A. lappa ay isinagawa gamit ang isang HPLC na konektado gamit ang isang 1260 InfinityⅡ HPLC-system (Agilent, Pal Alto, CA, USA). Para sa chromatic separation, EclipseXDB C18 column (4.6 × 250 mm, 5 μm, Agilent) ay ginamit sa 35 °C. Isang kabuuan ng 100 mg ng ispesimen ay diluted sa 10 ML ng 50% methanol at sonicated para sa 10 min. Ang mga sample ay na-filter gamit ang isang syringe filter (Waters Corp., Milford, MA, USA) na 0.45 μm. Ang komposisyon ng mobile phase ay 0.1% phosphoric acid (A) at acetonitrile (B) at ang haligi ay na-eluted tulad ng sumusunod: 0-60 min, 0%; 60–65 min, 100%; 65–67 min, 100%; 67–72 min, 0% solvent B na may flow rate na 1.0 mL/min. Ang effluent ay naobserbahan sa 210 nm gamit ang dami ng iniksyon na 10 μL. Ang pagsusuri ay isinagawa sa triplicate.
2.3. Pabahay at Pamamahala ng Hayop
Binili mula sa Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, Korea) ang mga lalaking daga ng Sprague–Dawley (SD) na may edad na 5 linggo at lalaking ICR mice na may edad na 6 na linggo. Ang mga hayop ay pinananatili sa isang silid gamit ang pare-parehong temperatura (22 ± 2 °C) at halumigmig (55 ± 10%) at isang ilaw/madilim na cycle ng 12/12 h. Ang mga hayop ay pamilyar sa kondisyon ng higit sa isang linggo bago magsimula ang eksperimento. Ang mga hayop ay may ad libitum na supply ng feed at tubig. Ang kasalukuyang mga tuntuning etikal para sa pag-aalaga at paghawak ng hayop sa Gachon University (GIACUC-R2019003) ay mahigpit na sinusunod sa lahat ng mga pamamaraan ng eksperimentong hayop. Ang pag-aaral ay dinisenyo na bulag sa imbestigador at parallel na pagsubok. Sinunod namin ang paraan ng euthanasia ayon sa mga alituntunin ng Animal Experimental Ethics Committee.
2.4. Iniksyon at Paggamot ng MIA
Ang mga daga ay random na pinaghiwalay sa 4 na grupo, katulad ng sham, control, indomethacin, at A. lappa. Ang pagiging anesthetized na may 2% isofluorane O2 mixture, ang mga daga ay na-injected gamit ang 50 μL ng MIA (40 mg/m; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) intra-articularly sa mga joint ng tuhod upang humantong sa eksperimentong OA. Ang mga paggamot ay isinagawa tulad ng sa ibaba: ang mga control at sham na grupo ay pinananatili lamang sa AIN-93G na pangunahing diyeta. Tanging, ang indomethacin group ay binigyan ng indomethacin (3 mg/kg) na isinama sa AIN-93G diet at A. lappa 300 mg/kg group ay itinalaga sa AIN-93G diet na dinagdagan ng A. lappa (300 mg/kg). Ang mga paggamot ay ipinagpatuloy sa loob ng 24 na araw mula noong araw ng OA induction sa rate na 15-17 g bawat 190-210 g na timbang ng katawan araw-araw.
2.5. Pagsukat ng Timbang
Pagkatapos ng OA induction, ang pagsukat ng kapasidad na nagdadala ng timbang ng mga hind limbs ng mga daga ay isinagawa gamit ang incapacitance-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, USA) bilang naka-iskedyul. Ang pamamahagi ng timbang sa mga hind limbs ay kinakalkula: weight bearing capacity (%)
